CART（Chimeric Antigen Receptor T cell）細胞治療是非常有前景的腫瘤治療方法，中文翻譯為“嵌合抗原受體T細胞”。嵌合抗原受體（Chimeric Antigen Receptor，CAR）是由人工設計合成的跨膜蛋白，包括細胞外、跨細胞膜以及細胞內三個部分。CAR的細胞外部分主要是識別特定抗原的單克隆抗體可變區（scFV），負責識別特異性抗原。跨膜區確保CAR可以在細胞膜上定位，而細胞內區域則負責激活T細胞，產生T細胞介導的免疫反應。臨床數據表明，CART在B細胞惡性腫瘤治療中取得了很好的療效。但是，目前采用的方法都是自體過繼細胞治療（autologous adoptive cell transfer，ACT），這種方法昂貴並且耗時。對於新生兒及老年患者，很難獲得足量且狀態良好的淋巴細胞用於CART細胞治療。因此目前CART細胞治療的一個重要研究方向是怎樣使用一個健康獻血者的T細胞製備大量的CART細胞，滿足數百名患者的臨床使用。這一技術的建立將極大降低CART療法的成本，可以更好的保證統一製備的細胞質量，而且患者在需要時可以馬上得到CART細胞進行治療。 

　　使用異體供者T細胞製備通用型CART用以治療多個患者，必須保證其安全性，確保過繼細胞不能攻擊患者自身細胞，同時需要降低其自身的免疫原性避免宿主細胞的攻擊。所以王皓毅研究組利用CRISPR-Cas9技術將αβT-cell receptor (TCR)從異體的CART細胞中敲除，避免移植物抗宿主病（graft-versus-host-disease，GVHD）的發生，將人類白細胞抗原（HLA）敲除降低自身的免疫原性。另外，PD-1是同腫瘤免疫逃逸相關的T細胞表麵抑製因子，考慮到阻斷PD-1信號通路在許多腫瘤類型中都取得了較好的療效，研究人員同時在CART細胞中敲除了PD-1基因，來阻斷PD-1信號通路。製備異體CART細胞需要進行多基因同時編輯，CRISPR-Cas9這一RNA介導的DNA核酸酶係統是非常適合的技術平台。在此項研究中，利用CRISPR-Cas9係統對CART細胞進行雙基因（TRAC和B2M）或者三基因（TRAC，B2M及PD-1）敲除。結果表明，這些經過基因編輯的CART細胞同普通CART細胞相比，在體外及體內具有相當或更強的腫瘤細胞殺傷功能，有望成為臨床應用的效應細胞。基因編輯技術聯合過繼免疫在腫瘤及HIV/AIDS治療中具有廣泛的應用前景，這一方法的建立為這些疾病治療的研究奠定了堅實的技術基礎。 

　　該項研究在12月2日以“CRISPR-Cas9 mediated multiplex gene editing in CAR-T cells” 為題在線發表在Nature旗下 Cell Research。這一工作由必威精装版app西汉姆联 王皓毅研究組與宣武醫院以及北京臍帶血庫合作完成，劉曉娟、張永平和程晨為論文共同第一作者。該研究得到了幹細胞與生殖生物學國家重點實驗室周琪院士以及各位同事的大力幫助和支持，同時得到了科技部863課題，國家自然科學基金和中科院幹細胞先導專項的資助。（論文鏈接）